嗜尸性蝇类分子鉴定

2020年，在司法部《法医类司法鉴定执业分类规定》（司规〔2020〕3号）中，已经明确将法医昆虫学列至第二章法医病理鉴定条款中。该文件的颁布，使昆虫学证据终于能够合法有效地用于法庭审判阶段，法医昆虫学研究和应用也必将迎来新一轮高潮。
随着法医昆虫学的不断发展，应用嗜尸性昆虫的生长发育规律和尸体上昆虫演替规律推断死亡时间成为可能，但这要求快速、准确地鉴别嗜尸性昆虫的种属。分子生物学的快速发展为嗜尸性蝇类种属鉴定提供了新的途径，经过大量的尝试与探索，特别是近十几年来，国内研究者在全国不同地域采集蝇类标本进行序列分析研究，在提取方法、基因片段种属鉴定效果、种属鉴定应用等方面取得了较大的研究成果。
本书根据国内相关记录和研究，结合本人科研实践，对进行过分子鉴定的蝇种、地区及采用的分子标记进行阐述，同时以蝇类分子鉴定中的关键点单独建立章节，以期为我国嗜尸性蝇类的种属鉴定提供基础方法，促进法医昆虫学的发展和应用。

翟仙敦
2021年11月

翟仙敦，河南科技大学，副院长、副教授，从事法医昆虫学分子鉴定研究多年，主持该领域河南省科技厅项目1项，河南省教育厅项目一项。昆虫研究方向，已经毕业研究生5名。发表该领域论文10篇，授权发明专利1项，实用新型专利1项。
1.河南省基础与前沿课题（112300410082）嗜尸性蝇类种属鉴定新遗传标记及其突变规律研究，已结题，主持。
2.河南省高等学校重点科研项目（18B310002）河南地区嗜尸性蝇类全线粒体基因组检测分析及地区数据库的建立，已结题，主持。

本书通过总述、分述，再总述介绍了嗜尸性蝇类分子鉴定的应用发展状况、蝇类DNA提取的评价、分子标记的选择以及未来分子鉴定的趋势等内容，是一本基础理论与实践并重的实用工具书。
尽管传统的形态学分类仍旧被广泛应用，但分子生物学的快速发展给嗜尸性蝇类的种属鉴定提供了新的契机，它能够在基因水平上对物种进行快速有效的鉴别，同时还可以探讨昆虫的系统发育学特点。
本书共七章，基于以线粒体和核基因为主的条形码技术为嗜尸性蝇类分子鉴定的研究热点，将分子与形态学鉴定相结合，为嗜尸性蝇类种属鉴定提供更准确、可靠的参考依据。随着测序成本的降低，目前GenBank数据库中常见嗜尸性蝇类的参考序列已基本覆盖，因此分子鉴定将被广泛应用于实际案件中。

第一章我国嗜尸性蝇类分子鉴定的研究现状与分析1
一、研究背景1
二、嗜尸性蝇类用于推断PMI的瓶颈3
三、分子生物学鉴定4
四、研究现状及分析8
五、展望12
参考文献13

第二章嗜尸性蝇类DNA提取16
第一节材料与方法17
一、主要试剂及仪器17
二、实验方法17
第二节提取方法的结果21
一、DNA浓度和纯度检测结果21
二、电泳检测结果22
三、PCR产物电泳检测结果22
第三节提取方法的分析与评价23
参考文献25

第三章常用嗜尸性蝇类分子标记27
第一节线粒体DNA分子标记28
一、线粒体细胞色素氧化辅酶Ⅰ29
二、线粒体细胞色素氧化辅酶Ⅱ34
三、16S rDNA35
第二节核DNA分子标记37
一、ITS238
二、28S rRNA40
第三节其他遗传标记41
参考文献42

第四章洛阳地区嗜尸性蝇类的分子鉴定44
第一节两种基因片段用于分析嗜尸性丽蝇45
一、材料与方法45
二、结果47
三、小结57
第二节两种基因片段分析常见嗜尸性麻蝇58
一、材料与方法59
二、结果59
三、小结66
参考文献68

第五章最常见近缘种的分子生物学研究70
第一节嗜尸性丽蝇的ITS2基因序列分析71
一、材料与方法71
二、结果73
三、小结78
第二节近缘种铜绿蝇和丝光绿蝇ITS2基因序列分析80
一、材料与方法80
二、结果80
三、小结82
第三节多分子标记对叉叶绿蝇和亮绿蝇的序列分析87
一、材料与方法88
二、结果92
三、小结101
参考文献103

第六章嗜尸性蝇类序列分析的法医学意义105
第一节嗜尸性蝇类与死亡时间推断105
第二节嗜尸性蝇类与死亡地点推断110
参考文献114

第七章基于CNKI的嗜尸性蝇类文献分析117
一、研究过程与分析117
二、研究结论与启示124
参考文献125