石榴多酚的生物学活性研究

石榴，是一种长寿命并耐干旱的植物，较适于种植在干旱和半干旱地区，原产巴尔干半岛至伊朗及其邻近地区，于大约两千年前传入中国。目前在我国主要产区有陕西临潼、新疆叶城、山东枣庄、安徽怀远、四川会理和云南巧家等。
石榴营养丰富。据测定，一般石榴果实中含糖11%～15%、可溶性果酸0.46% ～0.68%，还原性维生素C4.23～10.27mg/100g、磷8.9～10mg/100g、钾216～249.1mg/100g、钙1.06 ～ 2.98mg/100g、镁6.5 ～6.76mg/100mg、单宁59.8～73.4mg/100g，另外还含蛋白质、脂肪、花青素、粗纤维等。石榴含有较多的功效物质，主要有酚类、鞣质类、黄酮类、生物碱及有机酸类化合物，石榴各个部位所含活性成分种类及含量存在较大差异，石榴的果皮、叶、花、籽和果汁中鞣质类、黄酮类、生物碱、有机酸含量各有偏重，石榴籽中则多含甾类、脂肪酸、甘油三酯等；石榴花、果汁中则含大量花色苷。
石榴还具有较为广泛的药用价值。据历代医学家及中医临床经验证明，石榴具有生津化食、抗胃酸过多、软化血管、止泻、解毒、降温等多种功能，医学界用石榴果实治疗肝病、高血压、动脉硬化等。石榴根皮苦涩温，具有杀虫涩肠之功能，可作驱虫之药。石榴花酸涩平，具有止血收敛功效，适用于创伤止血、中耳炎，还可泡水洗眼，有明目之效。石榴叶捣碎外敷，可治跌打损伤。近年来，石榴以其营养丰富和较为广泛的药用价值而受到研究者的广泛关注。国内外研究者对石榴的医疗保健功能做了大量的研究工作，已证实石榴在抗氧化、抗突变、抑制炎症、降低脂肪、预防动脉粥样硬化和癌症等方面具有积极的作用。
本 书概括了石榴多酚的组成、提取以及多种生理活性的研究，为石榴多酚的推广应用提供了一定的理论基础。本书内容专业性较强，较适合高校教师、研究生和科研工作者参考，为植物化学物活性成分研究人员提供了一定的研究思路。
本书大部分研究内容是在陕西师范大学食品营养与安全实验室且在李建科教授的指导下完成的，并得到了国家基金项目(31171677)和河南科技大学博士科研启动基金(13480068)的支持，在此表示衷心感谢! 另外，在撰写过程中参考了有关中外文献，对这些文献的作者也表示衷心的感谢!
限于编者水平，书中难免有不足之处，敬请广大读者批评指正，以便将来修订再版时加以改进。

著者
2023年2月

本书先概述了石榴多酚的组成、主要活性成分及其生物学活性，然后详细阐述了针对石榴活性成分展开的研究进展，包括石榴汁降血脂的研究，石榴多酚抑制泡沫细胞脂质积累的研究，石榴多酚促进泡沫细胞胆固醇流出的研究，安石榴苷、鞣花酸和没食子酸抑制泡沫细胞形成的研究，石榴鞣花酸抗肺癌的研究。全书内容丰富，专业性和指导性较强，为石榴多酚的推广应用提供了一定的理论基础。
本书较适合高校生物技术、生物工程、医药、化工等专业教师、研究生和科研工作者参考，同时也为上述行业产品研发人员提供了一定的研发思路。

第1章 石榴多酚的生物学活性概述 1
1.1 石榴概述 1
1.2 石榴多酚及其主要活性成分 2
1.3 石榴多酚的生物学活性 4

第2章 石榴汁降血脂的研究 12
2.1 材料与仪器 13
2.1.1 试验材料 13
2.1.2 试验仪器 14
2.2 试验方法 14
2.2.1 实验动物及饲料配方 14
2.2.2 总酚含量的测定 15
2.2.3 黄酮类物质含量测定 16
2.2.4 原花青素含量的测定 17
2.2.5 清除DPPH自由基的能力测定 18
2.2.6 实验动物分组及处理 19
2.2.7 血清血脂指标测定 20
2.2.8 肝脏指数的测定 21
2.2.9 血液抗氧化指标的测定 21
2.2.10 主动脉弓病理切片HE染色 21
2.2.11 数据处理 21
2.3 结果与分析 22
2.3.1 石榴汁多酚类成分含量 22
2.3.2 石榴汁清除DPPH自由基的能力 23
2.3.3 石榴汁对AS大鼠血脂的影响 24
2.3.4 石榴汁对AS大鼠ALT、AST和肝脏指数的影响 25
2.3.5 石榴汁对大鼠CRP的影响 26
2.3.6 石榴汁对大鼠血清总胆汁酸的影响 27
2.3.7 石榴汁对AS大鼠动脉粥样硬化指数的影响 29
2.3.8 石榴汁对AS大鼠脂质和蛋白质氧化的影响 29
2.3.9 主动脉弓标本HE染色 31
2.4 讨论 32
2.5 小结 34

第3章 石榴多酚抑制泡沫细胞脂质积累的研究 35
3.1 材料与仪器 37
3.1.1 试验材料与试剂 37
3.1.2 试验仪器 39
3.2 试验方法 41
3.2.1 试剂配制 41
3.2.2 石榴皮多酚提取物高效液相色谱分析 43
3.2.3 小鼠巨噬细胞Raw264.7的培养 43
3.2.4 石榴皮多酚对小鼠巨噬细胞Raw264.7存活率的影响 44
3.2.5 Raw264.7巨噬泡沫细胞模型的建立 45
3.2.6 石榴皮多酚对Raw264.7泡沫细胞内胆固醇蓄积的影响 45
3.2.7 石榴皮多酚对泡沫细胞清道夫受体基因mRNA表达的影响 47
3.2.8 石榴皮多酚对泡沫细胞清道夫受体蛋白表达的影响 53
3.2.9 数据处理与统计分析 57
3.3 结果与分析 57
3.3.1 HPLC鉴定石榴皮多酚组成成分 57
3.3.2 石榴皮多酚对Raw264.7巨噬细胞的安全浓度 57
3.3.3 Raw264.7巨噬细胞源性泡沫细胞模型的建立 59
3.3.4 石榴皮多酚对泡沫细胞内胆固醇含量的影响 60
3.3.5 石榴皮多酚对泡沫细胞清道夫受体CD36和SR-A mRNA和蛋白表达的影响 63
3.3.6 对PPARγ的影响 67
3.4 讨论 69
3.5 小结 72

第4章 石榴多酚促进泡沫细胞胆固醇流出的研究 73
4.1 材料与仪器 81
4.1.1 试验材料 81
4.1.2 试验仪器 81
4.2 试验方法 83
4.2.1 试剂配制 83
4.2.2 Raw264.7巨噬泡沫细胞模型的建立 83
4.2.3 石榴皮多酚对ApoA-1及HDL介导的泡沫细胞胆固醇流出影响 83
4.2.4 石榴皮多酚对泡沫细胞胆固醇流出相关基因表达的影响 84
4.2.5 胆固醇流出相关基因引物设计 84
4.2.6 细胞ACAT和nCEH 蛋白表达及其酶活性的检测 85
4.2.7 数据处理与统计分析 85
4.3 结果与分析 86
4.3.1 石榴皮多酚对ApoA-1及HDL介导的泡沫细胞胆固醇流出影响 86
4.3.2 石榴皮多酚对泡沫细胞ABCA1、ABCG1 mRNA和蛋白表达影响 87
4.3.3 石榴皮多酚对泡沫细胞SR-B1蛋白表达影响 91
4.3.4 石榴皮多酚对泡沫细胞LXRα基因表达影响 92
4.3.5 石榴皮多酚对泡沫细胞ACAT和nCEH的影响 96
4.4 讨论 99
4.5 小结 102

第5章 安石榴苷、鞣花酸和没食子酸抑制泡沫细胞形成的研究 103
5.1 材料和仪器 104
5.1.1 试验材料 104
5.1.2 试验仪器 104
5.2 试验方法 106
5.2.1 试剂配制 106
5.2.2 PC、EA和GA对Raw264.7巨噬细胞存活率的影响 106
5.2.3 PC、EA和GA对泡沫细胞胆固醇蓄积和流出的影响 107
5.2.4 PC对泡沫细胞胆固醇流入和流出相关蛋白表达的影响 108
5.2.5 统计分析 108
5.3 结果与分析 109
5.3.1 PC、EA、GA对小鼠巨噬细胞Raw264.7的安全浓度 109
5.3.2 PC、EA和GA对泡沫细胞内胆固醇含量的影响 110
5.3.3 PC、EA和GA对泡沫细胞清道夫受体CD36基因蛋白表达的影响 113
5.3.4 PC、EA和GA对泡沫细胞胆固醇流出的影响 115
5.3.5 PC、EA和GA对Raw264.7巨噬泡沫细胞PPARγ、LXRα、ABCA1和ABCG1蛋白表达的影响 117
5.4 讨论 120
5.5 小结 122

第6章 石榴鞣花酸抗肺癌的研究 123
6.1 材料与仪器 124
6.1.1 试验材料 124
6.1.2 试验仪器 124
6.2 试验方法 125
6.2.1 石榴鞣花酸提取物溶液配制及细胞培养 125
6.2.2 细胞增殖抑制试验 126
6.2.3 DAPI染色法分析细胞形态 126
6.2.4 细胞周期的检测 127
6.2.5 细胞凋亡率的检测 127
6.2.6 细胞内蛋白表达量的测定 128
6.2.7 数据分析 129
6.3 结果与分析 130
6.3.1 石榴鞣花酸提取物对A549肺癌细胞增殖的抑制作用 130
6.3.2 石榴鞣花酸提取物对A549肺癌细胞形态的影响 131
6.3.3 石榴鞣花酸提取物对A549肺癌细胞周期的影响 132
6.3.4 石榴鞣花酸提取物对A549肺癌细胞凋亡的影响 133
6.3.5 蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白表达量的结果 135
6.4 小结 137

附录 缩写词中英文对照表 138

参考文献 141